熒光分光光度計的基本原理、功能用途與分類
熒光分光光度計的基本原理
高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫色光通過濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)射熒光。熒光經(jīng)過過濾和反射后，由光電倍增管接受，然后以圖形或數(shù)字的形式顯示出來。物質(zhì)的熒光是正常條件下基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài)而產(chǎn)生的。這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，在返回基態(tài)的過程中，一部分能量又以光的形式返回。發(fā)射，產(chǎn)生熒光。
由于不同物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)不同，其激發(fā)態(tài)能級分布具有不同的特點。這種特性體現(xiàn)在各種物質(zhì)都有自己的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的熒光上。因此熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的差異可用于定性識別物質(zhì)。
在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時，熒光物質(zhì)的熒光強度通常與該物質(zhì)的濃度具有良好的比例關(guān)系，即IF=KC。利用這種關(guān)系，可以進行熒光物質(zhì)的定量分析。與可見分光光度法類似，熒光分析通常使用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行。
熒光分光光度計的基本結(jié)構(gòu)
1、光源：
高壓汞燈或氙弧燈，后者能發(fā)出高強度的連續(xù)光譜，在300nm～400nm范圍內(nèi)強度幾乎相等，所以比較常用。
2、激發(fā)單色儀：
放置在光源和樣品室之間的激發(fā)單色器或單色器用于濾除特定的激發(fā)光譜。
3、發(fā)射單色器：
置于樣品室和檢測器之間的是發(fā)射單色儀或第二單色儀，光柵通常用作單色儀。過濾掉特定的發(fā)射光譜。
4. 樣品室：
它通常由石英池（用于液體樣品）或固體樣品架（用于粉末或薄片樣品）組成。測量液體時，光源與檢測器成直角布置；測量固體時，光源與檢測器呈銳角排列。
5、探測器：
通常，光電管或光電倍增管用作檢測器。光信號可以被放大并轉(zhuǎn)換成電信號。
熒光分光光度計的功能特點
1. 熒光發(fā)射光譜
選擇實體樣品被一定波長的光激發(fā)，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強度與發(fā)射波長的函數(shù)關(guān)系，即得到熒光發(fā)射光譜。
2. 熒光激發(fā)光譜
選擇一定的熒光發(fā)射波長，記錄熒光發(fā)射強度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，得到熒光激發(fā)光譜。
3.時間分辨技術(shù)；
它可用于區(qū)分和測量混合物中光譜重疊但壽命不同的成分。
時間分辨熒光測定公式如下：
P(t) = P0 EXP (-t /τ)
其中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)
P0：強度值
EXP：指數(shù)運算符
t : 時間值
τ：熒光平均壽命
熒光分光光度計產(chǎn)品應(yīng)用
分析光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，可用于生物化學(xué)、生物醫(yī)藥、環(huán)境化學(xué)等部門。
熒光分光光度計的分類
熒光光譜具有靈敏度高、選擇性強、樣品體積小、方法簡單、工作曲線范圍寬等優(yōu)點。可廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機和無機化學(xué)等領(lǐng)域。
熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手動控制熒光分光光度計、自動記錄熒光分光光度計和計算機控制熒光分光光度計三個階段。
分光光度計；熒光分光光度計還可以分為單光束熒光分光光度計和雙光束熒光分光光度計兩大系列。
經(jīng)過以上一步一步的分析和闡述，我們就不難理解熒光分光光度計的工作原理了。最后，我想提一點小意見。一開始，我們實驗室使用的是奧林巴斯熒光分光光度計。
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